烷二萜具有5/7/6/3四环骨架。B/C环反式稠合，C/D环顺式稠合。此类化合物具有致炎，促癌作用，如，化合物：12-O-Tetradecanoyl-phorbol-13-acetate。然而，有些 烷二萜具有抗癌作用，如：Phorbol12-myristate13-acetate（一种佛波酯，PKM），也是蛋白激酶C的激活剂。
Wnt信号通路是细胞增殖分化的关键调控环节，在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用。拮抗此信号通路可以调控肿瘤细胞的增殖，发挥抗癌活性。
作者从蒿状大戟分离出一个具有2- -2-环 酮基团的6/6/3环体系的新骨架化合物1。作者根据推测的生合成途径由前体化合物3对1进行仿生半合成，令人意外的是，作者得到一个具有5/5/6/3四环体系化合物2。因此，本文也阐释了化合物2的形成机制。
提取分离
蒿状大戟的地上部分(6.0kg)在风干粉碎后，使用70% 在室温下提取(10L×2d×3)。经浓缩后，经石油醚(4×1.5L), (4×1.5L),正 n-BuOH(4×1.5L)萃取。石油醚层萃取物(72.0g)使用硅胶柱分离，使用石油醚： 溶剂系统梯度洗脱，得6个馏分（A-F）,FractionB(3.9g)使用SephadexLH-20凝胶柱分离，得到Fr.B-1?Fr.B-2两个馏分。使用半制备液相(MeOH–H2O=65:35)与制备液相(MeOH–H2O=75:25）分离Fr.B-1馏分，得到化合物1(13.0mg,tR=29.1min).
结构解析
EuphordraculoateA(1)，分子式为C31H36O7,这31个碳中包含7个 ，1个亚 ，13个次 ，还有10个碳属于季碳。从氢谱与碳谱中观察到一组苯 基信号（δH8.02×2,7.57,7.46×2;δC.4,.8×2,.6×2,.1,.0），一个异丁 信号（δH1.07,1.08,
2.45;δC18.8,18.9,34.3,.8），除此之外，还发现四个烯碳信号（δC.3,CH;.2,C;.7,C;.6,CH）与两个羰基信号（δC.9，.5）。结合计算得到的14个不饱和度与以上碳的归属，推测还有4个环存在。比较已知化合物3的碳谱与化合物1的碳谱，发现1中出现了一个新的羰基碳(δC.5)和一个亚 (δC37.9)，而不是3中的两个亚 ，且C-6,C-7,C-8,C-15信号有差异。因此，推断化合物3的7元环与化合物1存在差异。从HMBC中H-1与C-2,C-3,C-4,C-15,C-16相关;H-4a与C-1,C-2,C-3相关;H-4b与C-3和C-15相关，COSY谱中H-1/H-15/H2-4存在自旋系统，证明1中存在2- -2-环 酮基团且通过C-15与C-14相连（HMBC中H-15与C-14相关和H-8与C-15相关）。又根据HMBC中H-7与C-8相关,H-7与C-17相关,H-8与C-6相关和H-8与C-7相关，COSY谱中H-7/H-8交叉信号,证明 基与C-8相连。HMBC中只有H-7/H3-17与δC.5相关，说明C-14与C-5连接，符合α,β-不饱和δ-内酯模型，也符合化合物1与3之间相对分子量相差2。由此确定化合物1与化合物3的平面结构差异。
已知 烷二萜的C/D环顺式稠合，通过ROESY谱确定化合物1的相对构型。结合H-9/Me-19,H-8/Me-18,H-8/H-15,H-8/H-13,H-12/Me-20之间相关，确定H-8，C-14上的环 酮部分和C-12上的苯 为β构型，20位上的 为α构型。通过比较计算ECD与实验ECD确定化合物1的 构型为8S,9R,11R,12R,13R,14S,15S。
化合物2，经高分辨质谱得出分子式为C30H36O7。分析氢谱与碳谱，与化合物1对比，发现化合物1和2都拥有 化的α，β-不饱和酮基，六元环结构，二 环 ，和苯 基与异丁 。不同的是，化合物2的COSY谱中存在H-15/H-4/H-6/H-8相关，与HMBC中H-15与C-14相关和H-8与C-14相关，证实化合物2的结构中五元环结构由 烷型的七元环变成。结合HMBC中H-6与C-7相关和H3-17与C-7相关，证实 基连接在C-6上。因此确定化合物2为重排的5/5/6/3 烷型二萜。作者通过单晶衍射技术与计算ECD法确定化合物2的结构与 构型。
化合物3历经retro-aldol反应，断裂C-4与C-5之间连接。C-5形成醛羰基；随后被氧化成羧基，再与C-14 发生分子内酯化反应，生成化合物1.
作者使用不同碱（NaH,DBU,LDA,LHMDS）尝试对1进行仿生合成均不成功。但是，作者在干燥的 呋喃中与碱性条件下（NaH）得到化合物2.
作者推测其形成1a的方式如上所述，接下来进行分子内Michael加成反应形成中间体2a，发生1,2环加成，断裂双键，生成化合物2.作者使用18O标记实验,验证2a到2的具体机制。限制于化合物3的量与难于获得2a中间体，作者使用由inhoffenlythgoediol反应得到的中间体aldehyde4为模型（Scheme2），用18O2氧化，得到标记得产物5a(HREIMS:m/z.M+,C12HO18O,.).证实C-C键断裂机制。
Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤发展阶段表达异常活跃。寻找拮抗此信号通路的药物可发挥抗癌作用。可用·HEKW细胞[稳定转染Wnt3a、Renilla和SuperTopflash荧光素酶(ST-Luc)的HEK细胞）]检测化合物1-3对Wnt信号通路的抑制活性。发现加入化合物2的HEKW细胞呈剂量依赖性降低Wnt3a诱导的ST-Luc转录（图4A）。同时，HEKW细胞暴露于浓度递增（0-50μM）的化合物2中，24小时后，Wnt靶基因axin2、c-myc、cyclinD1和Survivin的表达明显受到抑制(图4B)。在HT29结直肠癌细胞证实存在同样现象。β-catenin是典型的Wnt信号通路的重要组成部分，它可被 化破坏，然后通过蛋白酶体途径泛素化 被降解。作者使用Westernblot技术检测加入化合物2（时间与剂量均变化）孵育的HEKW细胞中总的β-catenin蛋白水平和 化的β-catenin的蛋白水平的变化（图4C-D）。因为Wnt信号通路与细胞增殖密切相关，因此使用MTS法检测化合物2对Caco2,HT29,HCT细胞抑制活性，IC50分别为10.97,31.78,42.58μM。综上所述，化合物2具有良好抗癌活性，可具有开发先导抗癌药物的潜力。
文章总结
作者发现自然界中存在一个新的6/6/3三环体系的 烷二萜骨架。作者不仅推测化合物1的生合成途径，还采用半合成的方式尝试对其进行仿生合成。尽管没有成功，但作者半合成一个具有5/5/6/3四环体系的 烷二萜骨架化合物2，证实其合成过程中2- 醛片段的脱碳机理。发现化合物2的具有良好拮抗Wnt信号通路活性。
本文于年7月13日在线发表于ACS旗下期刊OrganicLetters
王莉为 作者，通讯作者为*胜雄研究员，中国科学院昆明植物研究所为通讯单位
文章
本文编辑：佚名
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